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  • 3t3-l1 3T3-L1细胞株
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    3t3-l1 3T3-L1细胞株 传代:

    吸弃原培养液

    PBS洗一两次

    加入400ul0.125%胰酶(原代zui好加0.05% EDTA)消化

    转动培养盘,保证整个盘面都被trypsin液润过

    吸弃trypsin37度消化3min-->以完全培液(DMEM+10% FCS1/1000Biotin+1/1000泛酸钙-->吸打(枪的吸力调至zui小),110接种,前后左右摇晃培养盘,细胞均匀后放入培养箱继续培养(10%CO2 ,37度)

    3t3-l1 3T3-L1细胞株 冷冻管解冻

    取出冷冻管后, 须立即放入37 ℃水槽中快速解冻, 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化, 并注意水面不可超过冷冻管盖沿, 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时, 必须注意安全, 预防冷冻管之爆裂。

    3t3-l1 3T3-L1细胞株 培养经常出现的问题

    细胞出现脱落现象,加入诱导液后,操作一定要轻,尤其是加培养基,从培养板侧壁流下

    诱导分化初期培养基很容易变黄,这是正常现象,若担心过低的PH值过低损伤细胞,可以用点HEPES,或直接多加些培养基

    染上的 也不知道是不是脂滴,而且很难看出细胞轮廓,这很可能是没有分化成功,与用不用染细胞核无关。不染核,单用OIL RED就可显著看到细胞轮廓和脂滴。分化成熟后的脂肪细胞,细胞核会被脂滴“挤”到靠近细胞膜的边缘处。

    光镜下即可明显区分出分化和未分化的细胞。

     

    3t3-l1 3T3-L1细胞株 来源:慧颖细胞库

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